Essee ABTS
Se on analyyttinen menetelmä, jossa käytetään spektrofotometristä mittausta näytteen hapettumisenestokapasiteetin määrittämiseksi. UV-Vis-spektrofotometriä käyttäen mitataan ABTS-+ -radikaalia sisältävän liuoksen absorbanssi, joka muodostuu hapettamalla ABST (2, 2'-atsinobis (3-etyylibentsotiatsolin-6-sulfonaatti), väritön aine muodossa radikaalit värjätään absorboimalla aallonpituuksien ominaisuuksia näkyvällä alueella. Antioksidanttimolekyylien ABTS + +: n liuokseen lisääminen, joka voi vaikuttaa siirtämällä sekä vetyä että elektronia, määrittää radikaalin pelkistymisen värittömään muotoon, sen seurauksena reaktioseoksen värjäytyminen. Tämä valkaisu, joka on verrannollinen läsnä olevan antioksidantin määrään, voidaan mitata absorbanssin pienenemisenä tietyn ajan kuluessa tietyllä aallonpituudella (734 nm). absorbanssiarvot, jotka on mitattu tunnetuiksi määriksi vertailumääritykseksi valittua antioksidanttimolekyyliä, joka on tavallisesti askorbiinihappo tai Trolox (tässä tapauksessa puhumme TEAC Trolox Equivalent Antioksidantin kapasiteetin antioksidanttiaktiivisuudesta.
ABTS: n käyttöön perustuvan antioksidanttitehon mittauksen etuna on se, että se on yksinkertainen ja nopea. Lisäksi se mahdollistaa sekä hydrofiilisten että lipofiilisten antioksidanttien mittaamisen laajalla pH-alueella. On kuitenkin pidettävä mielessä, että käytetty radikaali (ABTS + +) ei ole fysiologinen eikä ole läsnä biologisissa järjestelmissä ja että useiden kyseessä olevien antioksidanttien reaktiokinetiikasta johtuvat mittaus toistettavuuden ongelmat korostuvat usein.
FRAP (ferrinen vähentävä antioksidanttiteho)
FRAP-testi mittaa antioksidanttien vähentämiskykyä rautaioneja vastaan. Se on elektroninsiirtoon perustuva menetelmä, jossa rauta- ionit kulkevat Fe3 +: sta Fe2 +: een. Tietyissä pH-olosuhteissa (3, 6) ja TPTZ: n (2, 4, 6-tris (2-pyridyyli) -s-triatsiini) läsnä ollessa nämä ionit muodostavat komplekseja, joilla on erilaiset ominaisuudet, erityisesti pelkistetty johdannainen (Fe2 + -TPTZ) on sininen väri, jonka maksimiabsorptio on 593 nm ja joka voidaan mitata spektrofotometrisesti. Antioksidantin aineen pelkistyskapasiteetti voidaan sen vuoksi mitata hapettimen sisältävän liuoksen absorbanssin muutoksena aallonpituudella, joka on määritetty vertailuun suhteessa standardiin (esim. Askorbiinihappoon) verrattuna.
FRAP-testi suunniteltiin mittaamaan plasman pelkistysvoimaa, mutta se sovitettiin sitten testaamaan puhtaiden yhdisteiden ja kompleksisten matriisien hapettumisenestokykyä. Itse asiassa, koska tämä menetelmä sallii vain pelkistävän kapasiteetin arvioinnin elektroninsiirron avulla, täysin sivuuttamalla vedynsiirron kautta vaikuttavien antioksidanttien vaikutusta, se ei salli mitata molekyylien, kuten tiolien ja proteiinien, osuutta, joilla on antioksidanttinen rooli biologisissa nesteissä (esim. veressä). Tämän menetelmän etuna on se, että se on yksi yksinkertaisimmista, nopeimmista ja halvimmista menetelmistä antioksidanttikapasiteetin määrittämiseksi in vitro.
DPPH-TEST
2, 2-difenyyli-1-pikri- hydratsyyli (DPPH •) on erittäin stabiili ja kaupallisesti saatavilla oleva typpiradikaali, jolle on tunnusomaista voimakas purppuranpunainen väri, joka tylsää, kun sitä pelkistetään antioksidanttikapasiteetin omaavan molekyylin läsnä ollessa. DPPH-liuoksen absorbanssin muutoksen spektrofotometrinen mittaus 517 nm: ssä antioksidanttiyhdisteen kanssa tapahtuneen reaktion jälkeen on mahdollista määrittää testattavan aineen pelkistyskapasiteetti riippumatta siitä, toimiiko se vedynsiirtoon tai elektroninsiirtoon. Tulos ilmaistaan yleensä ICso: na, eli antioksidantin määrä, joka kykenee vähentämään DPPH: n alkupitoisuutta 50%: lla.
Tämä on nopea, yksinkertainen ja edullinen menetelmä. Tämän analyysimenetelmän rajat rajoittuvat mahdollisuuteen, että analyysitulokset ovat vääristyneet siinä tapauksessa, että tutkittavat molekyylit absorboivat samassa aallonpituusalueessa DPPH-radikaalia tai suurten, steerisesti tarttuneiden molekyylien läsnä ollessa, jotka eivät ne tulevat reagoimaan radikaalin reaktiivisen osan kanssa. Tämä saa DPPH: n reagoimaan antioksidanttien kanssa jopa 1000 kertaa hitaammin kuin peroksyyliradikaalit.
PCL-TEST (fotokemiluminesenssi)
PCL-testi perustuu spesifisen radikaalilajin reaktioon, superoksidianioniin (O2 • -), joka on tuotettu fotokemiallisesti UV-säteilyllä, yhdisteellä, joka kykenee emittoimaan kemiluminesenssia. Käytetty markkeri on luminoli, molekyyli, joka vapaan radikaalin hapettamalla säteilee valoa, joka voidaan mitata käyttämällä erityistä instrumenttia (Photochem®). Antioksidanttien läsnäolo annosseoksessa deaktivoi radikaalilajit, jotka estävät kemiluminesenssin emissiota. PCL-analyysi on erittäin nopea ja herkkä. Lisäksi käyttämällä kahta erilaista analyyttistä protokollaa, joita kutsutaan ACW: ksi (antioksidanttikapasiteetti vesiliukoinen) ja ACL: ää (antioksidanttikapasiteettia liukeneva), vesiliukoisen komponentin (flavonoidit, E-vitamiini) kokonais antioksidanttikapasiteettiin voidaan mitata saman yhdisteen osalta. C, aminohapot jne.) Kuin rasvaliukoinen (tokoferolit, tokotrienolit, karotenoidit jne.). Tutkittavan tuotteen antioksidanttikapasiteetti saadaan vertaamalla arvoja, jotka on kirjattu standardin vertailumolekyyleihin, askorbiinihappoon ja ACL-protokollaan liittyvään askorbiinihappoon ja ACW-protokollan Troloxiin.
